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2012
Bachelor Thesis
Titel
Vergleich von Protein A- und Kationenaustauschchromatographie bei der Antikörperaufarbeitung aus Zellkulturüberständen
Titel Supplements
Einfluss der Vorbehandlung des Zellkulturüberstands
Abstract
In diesem Projekt wurde eine Methode zur Abreicherung von DNA und HCP aus anttikörperhatigen Zellkulturüberständen mit anschließender chromatographischer Aufreinigung untersucht. Die Abreicherung wurde mit einer Diafiltration bei saurem pH-Wert durchgeführt und anschließend der Antikörper durch drei verschiedene Kationenaustauscher weiter aufgereinigt. Um die Bindungsbedingungen zu ermitteln wurde zunächst eine Protein A Aufreinigung durchgeführt, um möglichst reines Produkt zu erhalten, da dieses eine Direktverfolgung des UV-Signals ermöglichen soll. Im Anschluss wurden die drei Kationenaustauscher untereinander auf Bindungsbedingungen, Abreicherungsraten und Ausbeuten verglichen. Des Weiteren wurden Aufreinigungen durch die Kationenaustauscher mit und ohne Vorbehandlung durchgeführt, um die Effizienz des Verfahrens zu ermitteln. Abschließend wurde eine Protein A Aufreinigung mit vorheriger Diafiltration durchgeführt, um einen Vergleich zu den drei Kationenaustauschern ziehen zu können.
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In this project a method was tested to reduce DNA and host cell proteins in the supernatant followed by a chromatographic step. The reduction of DNA and host cell proteins was done by a crossflow filtration at a low pH-value. The following step was the use of three different cation exchange chromatographic columns with different properties for further purification. To decide the conditions of binding, a protein-A purification was performed to get the best possible product in solution. This step was important to review the UV-signal on the UV gauge. Subsequently, the purification with these cation exchangers was compared according to the binding conditions, diminishing rates and yield. In addition the purification was done with and without a crossflow filtration, to evaluate the efficiency of the method. In the end a crossflow filtration was performed followed by a protein-A purification step to enable a comparison with the cation exchangers.
ThesisNote
Biberach, Hochschule, Bachelor Thesis, 2012
Verlagsort
Biberach